2013年9月22日 星期日

Ames TEST(艾姆氏測試法、安姆氏測試法、安氏測試法)

Ames TEST(艾姆氏測試法、安姆氏測試法、安氏測試法)
這是一個重要的發明,透過這樣的檢驗方式,我們可以得知被檢測的物質是否會引起基因突變或致癌?
圖一:發明ames test 的 美國柏克萊加州大學教授艾姆斯(B.N.Ames目前這位博士依然建在



原理:組氨酸缺陷型試驗菌株本身不能合成組氨酸,只能在補充組氨酸的培養基上生長,而在缺乏組氨酸的培養基上,則不能生長。

如果加入受測物質後...沙門氏桿菌還會繼續生長的話?就表示該物質有引起基因突變的可能性非常大,會被判定不安全,可能不能上市販賣....

如果是安全的就會呈現出左邊的培養皿中的樣子
如果發生了突變...就會以右邊的方式呈現....(通常突變的量大約要超過一倍以上,才會被判定為有疑慮),突變後的數量會以菌株的種類不同而有不同的評定標準。

所謂的S9萃取物,是要另外提煉製作(製作方法下)

大鼠肝微粒體酶的誘導和S9 的製備

誘導
最廣泛應用的大鼠肝微粒體酶的誘導劑是多氯聯苯(PCB 混合物),選擇健康雄性大鼠體重200g 左右,一次腹腔注射誘導劑,劑量為500mg/kg體重。

誘導劑溶於玉米油中,濃度為200mg/mL

動物經多氯聯苯誘導後第五日斷頭處死,處死前12h 停止飲食,但可自由飲水。

苯巴比妥鈉和β-萘黃酮結合也可做為誘導劑,健康雄性大鼠體重200g 左右,經口或腹腔注射80mg/kg 苯巴比妥鈉和80mg/kgβ-萘黃酮,連續天。

處死前16h 停止飲食,但可自由飲水。

由於化學物質經腹腔注射,容易引起肝臟形成外皮,不易剝離,推薦使用經口灌胃的方式。

製備
首先,用75%酒精消毒動物皮毛,剖開腹部。

在無菌條件下,取出肝臟,去除肝臟的結締組織,用冰浴的0.15mol/L 氯化鉀溶液淋洗肝臟,放入盛有0.15mol/L 氯化鉀溶液的燒杯裏。

按每克肝臟加入0.15mol/L 氯化鉀溶液3mL。用電動勻漿器製成肝勻漿,再在低溫高速離心機上,在4條件下,以9000g 離心10min,取其上清液(S9)分裝於塑膠管中。

每管裝2 mL ~3 mL

儲存於液氮生物容器中或-80冰箱中備用。

上述全部操作均在冰水浴中和無菌條件下進行。

製備肝S9 所用一切手術器械、器皿等,均經滅菌消毒。

S9 製備後,其活力需經診斷性誘變劑進行鑒定。

Ames Test 來偵測出致癌物質的試驗,只須幾天時間,費用亦只要些許。目前此法已廣泛為世界各國所採用,作為測試各種有害或毒性污染物致突變性的參考方法。
不論是什麼樣的東西,大致上在上市之前都必須作該項檢測,以確保使用安全安心。
目前全世界各國都有關的規定,連台灣也不例外。

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